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溶(róng)氧在發酵工程中(zhōng)的重要性
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發酵液中的溶氧濃度(Dissolved Oxygen ,簡稱DO)對微生物(wù)的生長和產物形成有(yǒu)著重要的影響。在發酵過(guò)程中,必須(xū)供給適量的無菌空氣,菌體才能繁殖(zhí)和積累(lèi)所需代謝產物。不同菌種及不同發酵階段 的菌體的需氧量是不同的,發酵液的DO值直接影響微生物的酶的活性、代(dài)謝途徑及產物產(chǎn)量。發酵過程中,氧的傳(chuán)質速率主要受發(fā)酵液中溶解氧(yǎng)的濃(nóng)度和傳遞阻力 影響。研究溶氧對發(fā)酵(jiào)的影響及控製對提(tí)高生產效率,改善產品質量等都有重要意義。

一、溶(róng)氧(yǎng)對發酵影響
溶(róng)解氧對發酵的影響分為兩方麵:一是溶氧濃度影(yǐng)響與呼吸鏈(liàn)有(yǒu)關的能量代謝,從而影響微生物生長;另一是氧直接參與產物合(hé)成。
(一(yī))溶氧對微生物自身生長的影響
根 據對氧的需求,微生物可分為專性好氧微生物、兼性好氧微生物和專性厭氧微生物。專性好氧微生物把氧作為最終電子受體,通過有氧呼吸獲取能量,如(rú)黴菌;進行 此類微生物發(fā)酵時一般應盡可能的提高溶解(jiě)氧(DO),以促進微生物生長,增(zēng)大菌體量。兼性好氧微生物的生長不(bú)一定需要氧,但如果在培養中供給氧,則菌體生 長更好,如酵母(mǔ)菌;典型如乙醇發酵,對溶DO的控製分兩個階段,初(chū)始提供(gòng)高DO值進行菌體擴大培養,後期嚴(yán)格控製DO進行厭氧發酵。厭氧和微好(hǎo)氧微(wēi)生(shēng)物能 耐受壞境中的氧,但它們的生長並(bìng)不需要(yào)氧,這些微生物在發(fā)酵生產中應(yīng)用較(jiào)少。而對於專性厭(yàn)氧微生物,氧則可對其(qí)顯(xiǎn)示毒性,如產甲(jiǎ)烷(wán)杆菌,此時能否限製DO 在一個較低值往(wǎng)往成為(wéi)發酵成敗的關鍵。
溶解氧對微生物自身生長的影響體現在多個方麵,其中對(duì)微生物酶的影(yǐng)響是不可忽略的重要因(yīn)素。研究了不同溶 氧(yǎng)對穀氨酸發酵中兩個關鍵酶(穀氨酸脫氫酶GDH和乳酸脫氫酶LDH)和代謝(xiè)流的影響,研究表明,在過低溶(róng)氧條件下,TCA循環代謝流量減小,不足以平(píng)衡 葡萄糖酵解速率,從(cóng)而刺激了(le)LDH的酶活(huó),使代謝流轉向乳酸生成,造成乳酸積累;而過高溶氧,GDH酶活明顯降低,且TCA循環流量加大,生成大量 CO2,造成(chéng)碳源損(sǔn)失,兩種情況均不利於穀氨酸生成。
啤酒工業中,在啤酒的發酵階段,酵母的繁殖需(xū)要有足夠的氧氣,在除此(cǐ)之外的任(rèn)何階段都應極 力避免氧的參與(yǔ)。啤酒發(fā)酵液總含氧(yǎng)量由酒體溶解氧和瓶頸空氣兩部分組成(chéng),一般情況下,啤酒中的含氧量超過2PPM時對生產就有明顯的危害(hài)。[3]因為氧氣 的存(cún)在會促使酵母采取有氧呼吸的代謝途徑,從而破壞(huài)乙醇發酵的厭氧(yǎng)代(dài)謝過(guò)程。但是,研究表明無氧條件下發酵生成(chéng)的乙醇低於溶氧控(kòng)製在1%-4%條件(jiàn)下生成 的乙醇。這主要是由於無氧條件下的菌(jun1)體量(liàng)遠遠低(dī)於有氧條件下菌體量,而乙醇的生成與菌體量有很大的聯係。
類似微生物發酵的活性汙泥法處理汙水的過 程中,DO的影響及控製也十分重要。曝氣池中氧氣不足(zú)和過量都會對微生物生(shēng)存(cún)環境帶來不利影響.當氧(yǎng)氣不(bú)足時,一方(fāng)麵由(yóu)於曝氣池中(zhōng)絲狀菌會大量繁殖,最終 產生汙泥(ní)膨脹;另一方麵會降低細菌分解的效果,延長處理時間,甚至導致生物處理失效.而氧氣(qì)過量(即過量曝氣(qì))則會由於絮凝劑遭到破壞而導致懸浮固體(tǐ)沉降 性變差,同時使能耗過高。
(二)溶氧對發酵產物的影響
對於好氧發(fā)酵來說,溶解氧通常既是營養因素,又(yòu)是環境因(yīn)素。特別是對於具有一定氧化還原性質的代謝產物(wù)的生產來說,DO的改變(biàn)勢必會影響到菌株培養體係的氧化還原電位,同時也會對細胞生長(zhǎng)和產物的形成產生影響。
在黃原(yuán)膠(jiāo)發酵中,雖然發酵液中的溶氧濃度對菌體生長速(sù)率影響不大,但是對菌體濃(nóng)度達到(dào)最大之後的(de)菌(jun1)體的穩定期的長短及產品質量卻有著明顯的影響。
需氧(yǎng)微生物酶的活性對氧有著很(hěn)強的依賴性。穀(gǔ)氨(ān)酸發酵中,高溶氧條件下乳酸脫氫酶(LDH)活性明(míng)顯比低溶氧條件下的LDH酶(méi)活要低,產酸中後期(qī)穀氨酸(suān)脫(tuō)氫酶(GDH)的酶活下降(jiàng)很快(kuài),這可能是由於在高溶氧條件(jiàn)下,劇(jù)烈的通氣和攪拌加劇了菌體(tǐ)的死亡速度和發酵活性的衰減。
DO值的高低還會(huì)改(gǎi)變微生物代謝途徑,以致改變發酵環境甚至使目標產物發生(shēng)偏(piān)離(lí)。研究(jiū)表明,L-異亮氨酸(suān)的代謝流量與溶氧濃度有密切關係,可以通過控製(zhì)不同(tóng)時期的溶氧來改變發酵過程中的代謝流分布(bù),從而改(gǎi)變Ile等氨基酸合成(chéng)的代謝流量。
二、溶氧量的控製(zhì)
對 溶(róng)解(jiě)氧進行控(kòng)製的目的是把溶解氧濃度值穩定控(kòng)製在一定的期望值或範(fàn)圍內。在微生(shēng)物發酵過程中,溶解氧濃度與(yǔ)其它過程參數的關係極為複雜,受到生物反應器中 多種物理、化學和微生物因素的影響和製約。從(cóng)氧的傳遞速率方程也可看出,對DO值的控製主要集中在(zài)氧(yǎng)的溶解和傳遞兩個方麵。
(一)控製溶氧量。 (C*-CL)是氧溶解的推動力,控製溶氧量首(shǒu)要(yào)因素是控製氧分(fèn)壓(C*)。高密度培養往往采用通入純氧的方式提高氧分壓,而厭氧發酵則采用各種方式將氧 分壓控製在(zài)較低水(shuǐ)平。如啤酒發酵,麥汁(zhī)充氧(yǎng)和酵母接種階段,一般要求(qiú)氧(yǎng)含量達到8~10PPM;而啤(pí)酒發酵階段,一般啤(pí)酒中的含氧量不得超過2PPM。
此 外,由於氧是難溶(róng)氣體,一定溫度和壓力下,DO值(zhí)有一上限。為此,向發酵液中加入(rù)氧載體是提高DO值(zhí)的一個行之有效的方法。實驗表明,在發酵基質(zhì)中添加 5%正十二烷,可明顯地(dì)提高發酵介質中的溶氧水平,改善供(gòng)氧條件(jiàn),維持(chí)溶氧的相對穩定(dìng),增加(jiā)菌(jun1)體濃度,提高L-天冬(dōng)酞胺酶發酵水平(21%左右)。
(二)控製氧傳遞速率。氧傳遞速率(lǜ)主要考慮KLa的影響因素。從一定意義上講,KLa愈大,好氧生物反應器的傳質性能愈好。
控 製KLa的途徑可分為操作變量、反應液的理化性質和反應器的結構3個部分。操作變量(liàng)包(bāo)括溫度、壓力、通風量(liàng)和轉速(攪拌功率)等;發酵液的理化性質包括發 酵液的黏度、表麵張(zhāng)力、氧的溶解度、發(fā)酵液的(de)組(zǔ)成成分、發酵液(yè)的流(liú)動狀(zhuàng)態、發酵類型等;反(fǎn)應器的結構指反應器的類型、反應器各部分尺寸的比例、空氣(qì)分布器(qì) 的形式等。當然有些因素是相互關聯的。
值得注意的是,在培養過程中(zhōng)並不(bú)是維持DO越高(gāo)越(yuè)好。即使是專性好氣菌,過高的DO對生長可能不利。過量的氧形成新生(shēng)O,超氧化物O2-和過氧(yǎng)化物基O22-,破壞(huài)許多細胞組分,進(jìn)而破壞微生物生(shēng)長。
三、結束語
發 酵液中的氧含量對菌體(tǐ)生長和產物形成都有著重要的影響,溶氧量的控製主要從(cóng)氧的溶(róng)解和傳遞兩個方(fāng)麵考慮。隨著計算機和自動化(huà)技術(shù)的發展,發酵工業中從DO 的測量到分析控製都正逐(zhú)步走向自動及控製一體化模式,研究利用DO作為補料的在線(xiàn)控製信號[9]將大大提高了(le)發酵調控的準確性和自動化性能。
然而(ér),在DO測量(liàng)方麵目前使用較多的三種方(fāng)法導管法,質譜電極法及電化學檢測法因均使用膜,在檢測精度和作為調(diào)控信號響應時間方麵還有(yǒu)待進一步提高(gāo)。

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